什么是siRNA转染?siRNA转染技术原理

RNA 代表核糖核酸和 siRNA——小干扰 RNA(也称为沉默 RNA)。siRNA 是分子中的一种短 (21-23 bp) 双链 RNA 核苷酸,在细胞中发挥各种生物系统的功能。siRNA转染是“转移”,将siRNA细胞内转移到细胞中,这是一个涉及基因沉默的过程。为了成功优化 siRNA 转染,需要合适的转染试剂和转染方法来进行体外和体内RNAi 实验。这些过程因细胞类型和转染方法而异。对于siRNA转染有许多针对特定细胞类型优化的体外siRNA 转染试剂。

什么是siRNA转染?siRNA转染技术原理

siRNA转染技术

体内siRNA于siRNA转染技术应用是基于纳米颗粒、聚合物或 脂质体的一种技术。

科学家们发现 siRNA 在大规模沉默基因表达和研究基因功能方面比较有价值。此类实验的成功通常取决于 siRNA的转染方法。可以使用优化的 转染试剂 和试剂盒在体外和体内转染 siRNA。

影响siRNA 转染效率的因素主要包括培养细胞的生长状况、转染发生的条件、引入的转染方法、以及实验中使用的 siRNA 的质量和数量。

同时,细胞密度、体积、暴露时间和 siRNA 细胞的数量对 siRNA 转染的成功率以及在 稳定转染实验中建立稳定的 RNAi 敲低细胞系也起着重要作用。

RNAi 诱导的基因沉默通常用于研究培养细胞中的基因功能。大多数情况下,这些基因功能是由引入小干扰 RNA (siRNA) 或 microRNA (miRNA) 的介入所引起的。siRNA 分子属于双链,长度为 20-24 个碱基对,终止于具有磷酸化 5′ 和羟基化 3′ 末端的两个突出核苷酸。一个 miRNA 分子是单链的,有 22 个核苷酸长;它与 RNA 的互补片段结合形成双链分子。这两种分子都可能在细胞中自然产生,也可能是人工引入的,它们的作用可能会持续三到七天。

什么是siRNA转染?siRNA转染技术原理

siRNA转染

siRNA体内转染现状

由于 siRNA 具有稳定性差、递送效率低、生物分布不正确以及靶向特定组织等缺点,因此体内 RNAi 研究面临了许多技术挑战。这些技术挑战意味着不适宜在动物身上进行 大量的RNAi 实验。

siRNA体内转染主要方法:是通过 RNAi技术:即:使用 siRNA 或 miRNA 、质粒 DNA 、病毒载体等,在体内表达生成短链 RNA (shRNA),随后加工成活性 siRNA。一般来说,基于病毒的 shRNA 载体在体内提供较高的递送效率,但构建起来比较耗费时间,并且存在免疫原性等问题。

使用 RNAi 技术面临的主要挑战之一是成功地将稳定的功能性 siRNA 或 microRNA 分子传递到目标组织。siRNA 或 miRNA 必须克服核酸酶的降解,逃避先天免疫系统的检测,从而减少脱靶效应并被靶组织所吸收。近来研究发现对 siRNA 或 miRNA 进行化学修饰可以增加它们在体内的稳定性。这些化学修饰维持了 siRNA 分子的效力、功效和特异性,并增加了它们在生物体动态环境中的整体稳定性。

目前市场上常用的siRNA转染试剂主要有RFect 系列转染试剂盒、Lipo2000、Lipo3000,RNAiMAX等都可以用于siRNA的体外化学转染法。

 

什么是siRNA转染?siRNA转染技术原理

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